sem掃描電鏡技術(shù)原理及方法的詳細(xì)介紹
日期:2023-04-06 09:57:24 瀏覽次數(shù):140
sem掃描電鏡技術(shù)原理:從電子槍陰極發(fā)出的直徑20(m~30(m的電子束,受到陰陽極之間加速電壓的作用,射向鏡筒,經(jīng)過聚光鏡及物鏡的會聚作用,縮小成直徑約幾毫微米的電子探針。在物鏡上部的掃描線圈的作用下,電子探針在樣品表面作光柵狀掃描并且激發(fā)出多種電子信號。這些電子信號被相應(yīng)的檢測器檢測,經(jīng)過放大、轉(zhuǎn)換,變成電壓信號,*后被送到顯像管的柵極上并且調(diào)制顯像管的亮度。顯像管中的電子束在熒光屏上也作光柵狀掃描,并且這種掃描運(yùn)動與樣品表面的電子束的掃描運(yùn)動嚴(yán)格同步,這樣即獲得襯度與所接收信號強(qiáng)度相對應(yīng)的掃描電子像,這種圖象反映了樣品表面的形貌特征。D二節(jié)掃描電鏡生物樣品制備技術(shù)大多數(shù)生物樣品都含有水分,而且比較柔軟,因此,在進(jìn)行sem掃描電鏡觀察前,要對樣品作相應(yīng)的處理。掃描電鏡樣品制備的主要要求是:盡可能使樣品的表面結(jié)構(gòu)保存好,沒有變形和污染,樣品干燥并且有良好導(dǎo)電性能。
一.樣品的初步處理
(一) 取材取材的基本要求和透射電鏡樣品制備相同。但是,對sem掃描電鏡來說,樣品可以稍大些,面積可達(dá)8mm×8mm,厚度可達(dá)5mm。對于易卷曲的樣品如血管、胃腸道粘膜等,可固定在濾紙或卡片紙上,以充分暴露待觀察的組織表面。
(二) 樣品的清洗用掃描電鏡觀察的部位常常是樣品的表面,即組織的游離面。由于樣品取自活體組織,其表面常有血液、組織液或粘液附著,這會遮蓋樣品的表面結(jié)構(gòu),影響觀察。因此,在樣品固定之前,要將這些附著物清洗干凈。
(三) 固定固定所用的試劑和透射電鏡樣品制備相同,常用戊二醛及鋨酸雙固定。由于樣品體積較大,固定時間應(yīng)適當(dāng)延長。也可用快速冷凍固定。
(四) 脫水樣品經(jīng)漂洗后用逐級增高濃度的酒精或丙酮脫水,然后進(jìn)入中間液,一般用醋酸異戊酯作中間液。
二.樣品的干燥sem掃描電鏡觀察樣品要求在高真空中進(jìn)行。無論是水或脫水溶液,在高真空中都會產(chǎn)生劇烈地汽化,不僅影響真空度、污染樣品,還會破壞樣品的微細(xì)結(jié)構(gòu)。
三.樣品的導(dǎo)電處理生物樣品經(jīng)過脫水、干燥處理后,其表面不帶電,導(dǎo)電性能也差。用掃描電鏡觀察時,當(dāng)入射電子束打到樣品上,會在樣品表面產(chǎn)生電荷的積累,形成充電和放電效應(yīng),影響對圖象的觀察和拍照記錄。
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