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超分辨熒光顯微鏡和普通熒光顯微鏡的區(qū)別 - 分析行業(yè)新聞

日期:2023-02-01 16:07 瀏覽次數(shù):97

  兩者在工作原理及應(yīng)用方面存在不同。分述如下:
  一、熒光顯微鏡
  1、熒光顯微鏡是以紫外線為光源, 用以照射被檢物體, 使之發(fā)出熒光, 然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。熒光顯微鏡用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運(yùn)輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。 細(xì)胞中有些物質(zhì),如葉綠素等,受紫外線照射后可發(fā)熒光;另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光,但如果用熒光染料或熒光抗體染色后,經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光,熒光顯微鏡就是對這類物質(zhì)進(jìn)行定性和定量研究的工具之一。
  2、熒光顯微鏡原理:
  (A) 光源:光源輻射出各種波長的光(以紫外至紅外)。
  (B) 激勵濾光源:透過能使標(biāo)本產(chǎn)生螢光的特定波長的光,同時阻擋對激發(fā)螢光無用的光。
  (C) 熒光標(biāo)本:一般用熒光色素染色。
  (D) 阻擋濾光鏡:阻擋掉沒有被標(biāo)本吸收的激發(fā)光有選擇地透射熒光,在熒光中也有部分波長被選擇透過。  以紫外線為光源,使被照射的物體發(fā)出熒光的顯微鏡。電子顯微鏡是在1931年在德國柏林由克諾爾和哈羅斯卡首先裝配完成的。這種顯微鏡用高速電子束代替光束。由于電子流的波長比光波短得多,所以電子顯微鏡的放大倍數(shù)可達(dá)80萬倍,分辨的*小極限達(dá)0.2納米。1963年開始使用的掃描電子顯微鏡更可使人看到物體表面的微小結(jié)構(gòu)。
  3、應(yīng)用范圍:用來放大微小物體的圖像。一般應(yīng)用于對生物、醫(yī)藥、微觀粒子等觀測。
  二、共焦顯微鏡
  1、共焦顯微鏡在反射光的光路上加上了一塊半反半透鏡,將已經(jīng)通過透鏡的反射光折向其它方向,在其焦點(diǎn)上有一個帶有針孔的擋板,小孔就位于焦點(diǎn)處,擋板后面是一個 光電倍增管??梢韵胂?,探測光焦點(diǎn)前后的反射光通過這一套共焦系統(tǒng),必不能聚焦到小孔上,會被擋板擋住。于是光度計測量的就是焦點(diǎn)處的反射光強(qiáng)度。
  2、原理:傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡使用的是場光源,標(biāo)本上每一點(diǎn)的圖像都會受到鄰近點(diǎn)的衍射或散射光的干擾;激光掃描共聚焦顯微鏡利用激光束經(jīng)照明針孔形成點(diǎn)光源對標(biāo)本內(nèi)焦平面的每一點(diǎn)掃描,標(biāo)本上的被照射點(diǎn),在探測針孔處成像,由探測針孔后的光電倍增管(PMT)或冷電耦器件(cCCD)逐點(diǎn)或逐線接收,迅速在計算機(jī)監(jiān)視器屏幕上形成熒光圖像。照明針孔與探測針孔相對于物鏡焦平面是共軛的,焦平面上的點(diǎn)同時聚焦于照明針孔和發(fā)射針孔,焦平面以外的點(diǎn)不會在探測針孔處成像,這樣得到的共聚焦圖像是標(biāo)本的光學(xué)橫斷面,克服了普通顯微鏡圖像模糊的缺點(diǎn)。
  3、應(yīng)用領(lǐng)域: 涉及醫(yī)學(xué)、動植物科研、生物化學(xué)、細(xì)菌學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、組織胚胎、食品科學(xué)、遺傳、藥理、生理、光學(xué)、病 ??????y????????V3930 理、植物學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、海洋生物學(xué)、材料學(xué)、電子科學(xué)、力學(xué)、石油地質(zhì)學(xué)、礦產(chǎn)學(xué)。